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甲基化測序（5mC）

DNA甲基化（DNA Methylation）是一種重要的表觀遺傳學(xué)修飾，在細(xì)胞分化、增殖、衰老等方面具有重要的調(diào)控作用。5-甲基胞嘧啶（5mC）是最重要的一種DNA甲基化修飾，廣泛存在于植物、動物等真核生物基因組中，被稱為“第五堿基”

全基因組甲基化（WGBS）

全基因組甲基化測序（Whole Genome Bisulfite Sequencing，WGBS）是通過 Bisulfite處理將基因組中未發(fā)生甲基化的C堿基進(jìn)行轉(zhuǎn)換，用以區(qū)分具有甲基化修飾的C堿基，并結(jié)合二代高通量測序技術(shù)判斷CpG/CHG/CHH位點是否發(fā)生甲基化的一種方法。通過WGBS，可實現(xiàn)單堿基分辨率的甲基化位點精準(zhǔn)、高效定位。

PacBio人全基因組甲基化

PacBio長讀長測序可直接對DNA分子進(jìn)行測序而不進(jìn)行擴(kuò)增，無需亞硫酸氫鹽處理或其他特殊的文庫構(gòu)建方法，即可從單個文庫中獲得高度準(zhǔn)確的堿基（熒光）和甲基化（動力學(xué)）信息。堿基序列信息和甲基化信息同時獲取，一份數(shù)據(jù)即可同時用于SNP、InDel、SV、CNV、甲基化、基因組組裝等研究應(yīng)用，并可識別單倍型層面等位基因特異性甲基化。

應(yīng)用方向

【醫(yī)學(xué)領(lǐng)域】

  • 表觀遺傳學(xué)：研究不同細(xì)胞類型、組織或發(fā)育階段之間的DNA甲基化差異，幫助揭示表觀遺傳變化在生物學(xué)過程中的作用；
  • 個體差異和種群遺傳學(xué)：研究個體之間的DNA甲基化差異，有助于解析甲基化的遺傳基礎(chǔ)，以及它如何影響個體的健康和易感性；
  • 疾病發(fā)生機(jī)制：比較正常和疾病狀態(tài)下的DNA甲基化模式，挖掘與疾病發(fā)生和進(jìn)展相關(guān)的甲基化變化，增進(jìn)對疾病發(fā)生和發(fā)展過程的理解；
  • 環(huán)境影響研究：外部環(huán)境因素（如營養(yǎng)、毒素、藥物等）可以影響DNA甲基化，了解環(huán)境因素如何通過甲基化改變基因表達(dá)，從而影響個體的生理和疾病風(fēng)險；

 

【農(nóng)學(xué)領(lǐng)域】

  • 植物生長調(diào)控：研究不同生長階段或不同環(huán)境條件下植物組織的甲基化狀態(tài)，揭示DNA甲基化對基因表達(dá)的影響，進(jìn)而了解其在植物生長發(fā)育中的作用機(jī)制；
  • 環(huán)境適應(yīng)機(jī)制：研究植物在面對干旱、鹽堿、病蟲害等逆境時的甲基化模式變化，識別與抗逆相關(guān)的甲基化標(biāo)記，從而為培育具有更強(qiáng)抗逆性的作物品種提供策略；
  • 品質(zhì)形成和改良：分析影響農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)的基因甲基化情況，如糖分、蛋白質(zhì)含量、色澤等，探索如何通過甲基化修飾來優(yōu)化作物的營養(yǎng)成分和口感；
  • 進(jìn)化研究：比較不同物種之間的DNA甲基化模式，揭示甲基化在進(jìn)化中的角色，有助于理解甲基化在物種適應(yīng)和多樣性產(chǎn)生中的貢獻(xiàn)；
產(chǎn)品優(yōu)勢
大規(guī)模的測序平臺

18臺Illumina測序平臺+26臺PacBio測序平臺，通量高、周期快、產(chǎn)出穩(wěn)定

穩(wěn)定的建庫流程

WGBS建庫重亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化效率99%以上，HiFi測序直接檢測甲基化，可實現(xiàn)全基因組層面單堿基分辨率的甲基化位點精準(zhǔn)、高效定位

多樣化的分析內(nèi)容

標(biāo)準(zhǔn)分析、多組學(xué)聯(lián)合分析、定制化分析等

豐富的項目經(jīng)驗

上千個WGBS項目經(jīng)驗，上萬個三代測序經(jīng)驗，為項目執(zhí)行提供保障

貼心的服務(wù)流程

從實驗設(shè)計、生信分析到售后問題的全面解答，保證高質(zhì)量的結(jié)果交付

案例解析

HiFi測序發(fā)現(xiàn)WGBS數(shù)據(jù)無法實現(xiàn)分型所以無法解釋hyper-mCpG事件

PacBio HiFi甲基化分析助力罕見病診斷

 

甲基化可調(diào)節(jié)基因的表達(dá)和關(guān)閉，與癌癥、衰老、老年癡呆等許多疾病密切相關(guān)，是表觀遺傳學(xué)的重要研究內(nèi)容之一。本研究選取152個家族的276個罕見病樣本生成HiFi數(shù)據(jù)集，以識別基因組中罕見的（~0.5%）多個甲基化CpG富集（hyper-mCpG）的事件。研究比較了WGBS（N = 1184）和HiFi-GS（N = 276）測得的CpG島數(shù)據(jù)中共有的93個樣本的相關(guān)性，顯示兩種方法之間有顯著一致性，相關(guān)性為0.90。共識別出25,543個罕見的hyper-mCpG，其中81%是等位基因特異性的，并預(yù)計可能會導(dǎo)致調(diào)控元件的失活。每位患者平均有30～40個hyper-mCpG與罕見病基因重疊，基于hyper-mCpG的分析解析了更多罕見病關(guān)鍵基因中先前被忽視的基因中的重復(fù)擴(kuò)增事件，使得更多的罕見病病例得以解釋。研究表明，HiFi測序可直接檢測罕見病患者基因組上的串聯(lián)重復(fù)和甲基化，還進(jìn)一步實現(xiàn)分型，有助于精準(zhǔn)分析致病原因。

參考文獻(xiàn)：Cheung WA, Johnson AF, Rowell WJ, et al. Direct haplotype-resolved 5-base HiFi sequencing for genome-wide profiling of hypermethylation outliers in a rare disease cohort. Nature Communications, 2023, 14(1): 3090.